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美華儀為您度解析薄層色譜儀的原理

更新時間:2017-10-19   點擊次數:7090次

薄層掃描儀是可以對斑點行掃描的用分光光度計,用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點,該斑點就吸收該組分征波長的單色光,剩余的單色光經透射或反射或發射熒光,由檢測器積分起來,獲得這塊斑點面積的待測物質含量。

  原理

  薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的種,是快速分離和定性分析少量物質的種很重要的實驗,屬固—液吸附色譜。它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來制樣品,此法別適用于揮發性較小或較溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及行柱色譜之前的種“預試”。

  薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發展起來的種微量、快速而簡單的色譜法,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成條線,則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來制樣品。故此法別適用于揮發性較小或在較溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否成。

  薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板端約1cm處的起點線上,涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內,浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。

  薄層色譜儀包括:薄層層板點樣器、手動涂布臺、干燥儲備箱、洗板架、紫外光探測器。可以快速分離脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質。

  類別

  1.離心薄層色譜儀 2.棒狀薄層色譜儀 3.手動薄層色譜儀 4.雙波長薄層色譜掃描儀 5.自動薄層色譜儀 6.旋轉薄層色譜儀 7.波長薄層色譜儀 8.型薄層色譜儀 9.二管陣列薄層色譜掃描儀 10.加壓薄層色譜儀 11.暗箱式薄層色譜攝影儀

  用途

  適用于化學、化、藥、臨床、農業、食品、毒理等域內的各種化合物的分離、制、定性鑒別、雜質檢查和含量測定。

  操作方法

  (1) 薄層板制備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向方向研磨混合,

  去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩地移動涂布器行涂布(厚度為0.2~

  0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置

  有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

  (2) 點樣 除另有規定外,用點樣器點樣于薄層板上,般為圓點,點樣基線距底

  邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為

  宜。點樣時注意勿損傷薄層表面。

  (3) 展開 展開缸如需預用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁

  上貼二條與缸樣、寬的濾紙條,端浸入展開劑中,密封缸的蓋,使系統平衡或

  按正文規定操作。

  將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5

  ~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封缸蓋,待展開至規定距離(般為10~15cm),

  取出薄層板,晾干,按各品種項下的規定檢測。

  (4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描

  定量,則可用薄層掃描法。

  薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構點及使用說明,

  結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結果

  的因素很多,故應在保證供試品的斑點在定濃度范圍內呈線性的情況下,將供試品與

  對照品在同塊薄層上展開后掃描,行并計算定量,以減少誤差。各種供試品,

  只有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。

  洗脫后測定法

  薄層經展開后用刮刀或捕集器將斑點的吸附劑捕集后,再用適當有機溶劑洗脫,然后用可見、紫外分光光度法、熒光分光光度法測定含量。

  但樣品斑點不能噴顯色劑,以免影響不測定,斑點位置的確定方法。

  樣品在紫外線下發射熒光的,可在紫外燈下觀察斑點并用針劃去斑點位置。

  用碘蒸汽顯色,在組分處理出棕色斑點(碘吸附后會揮發)。

  用標準物對照,將標準點于邊上測顯色時,蓋住樣品,定出斑點位置。




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